1 飼料中水分及揮發(fā)性物質(zhì)的含量測定
水分在飼料質(zhì)量控制中占有非常重要的地位，它影響飼料產(chǎn)品的質(zhì)量，是重要的質(zhì)量指標之一，同時又是一項重要的經(jīng)濟指標，與產(chǎn)品中其他各種技術(shù)指標的計算有著密切的聯(lián)系，因此測定水分非常重要。常用的測定方法是依據(jù)GB/T6435-2006《飼料中水分和其他揮發(fā)性物質(zhì)含量的測定》。
1.1 飼料中水分測定實驗操作中需要注意的問題
1.1.1 制樣是非常重要的步驟，首先必須采用幾何法和四分法進行縮分，然后使用植物粉碎機或咖啡磨，少用旋風磨。同時還要注意篩孔大小是否與檢驗要求相同，通常分樣篩的孔徑為0.42mm(40目)。因為粉碎粒度的大小直接影響分析結(jié)果的準確性?？讖竭^大不利于水分蒸發(fā)，孔徑過小、樣本過輕，不利于操作且使樣本易于被氧化。另外，還要注意過篩時一定要將樣品全部過篩并混合均勻。
1.1.2 稱樣皿應為玻璃或鋁質(zhì)，一般采用鋁質(zhì)較好，不宜破碎;稱樣皿的表面積能使樣品鋪開約0.3g/cm2(通常直徑為40mm以上，高度在25mm以下)，以利于水分蒸發(fā)，不宜過高或過細。
1.1.3 稱樣皿應預先在烘箱中烘30min，冷卻至室溫，稱重準確1mg。注意冷卻的時間應盡可能保持一致。
1.1.4 在稱樣時要特別注意防止水分的變化，對有些飼料例如維生素、咖啡等很容易吸水的物質(zhì)，在稱量時要迅速，否則越稱越重。稱量樣品時，要戴細紗手套或脫脂薄紗手套，禁止直接用手操作。
1.1.5 烘箱溫度 烘箱除定期請法定計量所進行校正外，平時操作時還要附加一支溫度計，能及時標示箱體內(nèi)的實測溫度，箱體內(nèi)每個位置也存在溫度差異，應注意控制。通常建議平均每升干燥箱空間最多放一個稱量瓶。
1.1.6 在烘箱中干燥時，稱樣皿應敞開蓋子且與蓋子一起干燥。
1.1.7 干燥時間 應針對不同飼料控制適當?shù)暮娓蓵r間，不一定越長越好，因為時間太短，水分可能還沒有完全逸出，太長可能物質(zhì)又會發(fā)生化學反應。
1.1.8 干燥器中的干燥劑用硅膠為好。要注意干燥劑的顏色(含鈷，干燥時呈藍色)變化，當吸水過多(變棕或白色)時，應放在烘箱中烘干(烘干條件：135℃，2～3h)，使之轉(zhuǎn)變?yōu)槊撍稍锷院笤儆谩?/p>
1.1.9 干燥器放置時間 冷卻時間也要控制好，尤其需要恒重時，每次在干燥器放置時間不一，也很難達到恒重要求。
1.2 飼料中水分測定過程特殊樣品的處理
1.2.1 當試樣為濕潤樣時，可取適量樣品置于預先已稱重的大蒸發(fā)皿中，在80℃的條件下進行初步的烘干，然后在室內(nèi)放置作為風干樣，求出其減量。
1.2.2 如果飼料樣品是含多汁的鮮樣，如青貯、牧草等，無法直接粉碎，應進行預干燥處理。稱取200～300g(準確至0.01g)鮮樣，在105℃烘箱中烘干15min，立即把溫度降至65℃，烘5～6h，取出在空氣中冷卻4h，稱量，失重即為初水分，冷卻后樣品所含水為吸附水。經(jīng)預先干燥處理的樣品，應按下式計算原來試樣中的水分含量：
原試樣中總水分(%)=預干燥減重(%)+[100-預干燥減重(%)]×風干試樣水分(%)。
1.2.3 某些含脂肪高的樣品，烘干時間長反而會增重，乃脂肪氧化所致，應以增重前那次稱重為準，且取最小值。
1.2.4 含糖分高的、易分解或易焦化試樣，應使用減壓干燥法(80℃，13KP，烘5h)測定水分。
1.2.5 含有揮發(fā)性物質(zhì)(如樣品中含有酒精、香精油、芳香酯等物質(zhì));或成分易氧化變成棕色或可引起新的化學變化(如奶制品、植物性油脂、糖類物質(zhì))不宜采用此法，應采用減壓蒸餾法比較合適。
1.2.6 含有果膠、明膠等的飼料，不能采用常壓干燥的水分。
1.2.7 對于液體與半固體樣品，要在稱量皿中加入海砂，使樣品疏松，擴大蒸發(fā)的接觸面，并且用一個玻璃棒作為容器。先放到沸水浴中烘，烘的差不多，再放到烘箱烘，否則不加海砂樣品容易使表面形成一層膜，造成水分不易出來。另外易沸騰的液體飛沫也先放到沸水浴中烘，以免重量損失。
1.2.8 樣品水分含量高于17%，脂肪含量低于120g/kg，按下式計算：
1.2.9 經(jīng)脫脂的高脂肪低水分試樣及經(jīng)脫脂和預干燥的高脂肪高水分試樣，按下式計算：
2 飼料中粗蛋白質(zhì)含量測定
粗蛋白質(zhì)是飼料中含氮物質(zhì)的總稱，除蛋白質(zhì)外，還包括非蛋白氮(NPN)，如氨、游離氨基酸、肽、硝酸鹽、胺鹽、酰胺、生物堿、含氮糖苷、尿素等含氮化合物。
采用GB/T 6432-94《飼料中粗蛋白質(zhì)的測定方法》，適用于配合飼料、濃縮飼料和單一飼料。
2.1 飼料中粗蛋白質(zhì)含量測定實驗操作中需要注意的問題
2.1.1 樣品需要粉碎并全部通過40目篩。
2.1.2 消化管中加濃硫酸時，應戴膠皮手套，且戴手套前應修剪指甲，以防止手套太緊或指甲太長劃破手套，以至于在操作時燒傷皮膚。
2.1.3 消化時應經(jīng)常轉(zhuǎn)動凱氏燒瓶，加熱應從低溫開始分階段升溫，待樣品焦化泡沫消失，再加強火力(360～400℃)，直至溶液澄清后，再加熱消化15min。消化中應防止管內(nèi)液體過度沸騰噴濺，上沖粘到瓶頸上，使得部分樣品消化不完全，造成系統(tǒng)誤差過大。消化管內(nèi)液體泡沫過多時可適當降溫。各種樣品的消化時間大致如下：預混料2h、配合飼料2h、菜籽粕2.5h、豆粕2.5h、魚粉3h。
2.1.4 因消化需要回流過程，為減少蒸餾逸出損失，建議消化管或凱氏燒瓶加蓋漏斗消化。
2.1.5 消化完成后，向容量瓶轉(zhuǎn)移，不要立即定容，因為此時濃硫酸加水釋放出大量熱，立即定容會造成偶然誤差偏大。
2.1.6 凱氏定氮蒸餾過程中，要求整套裝置呈密閉狀態(tài)，蒸餾前應檢查定氮儀各導管間的連接處是否密閉，以免產(chǎn)生泄露。
2.1.7 使用蒸餾儀器時，嚴禁將蒸餾瓶兩側(cè)的閥門同時關(guān)閉，以免發(fā)生爆炸。當蒸汽氣壓過大時，可使導氣管處于半關(guān)閉狀態(tài)。
2.1.8 蒸餾時蒸餾裝置的蒸汽發(fā)生器內(nèi)的水應加甲基紅數(shù)滴和硫酸數(shù)滴，且保持此溶液為橙紅色，以防止水中氨態(tài)氮的逸失而影響測定值。
2.1.9 在蒸餾結(jié)束時，應用蒸汽將蒸餾裝置反應腔中殘液洗凈并用蒸餾水沖洗冷凝管末端，洗液并入吸收液，以減少誤差。
2.1.10 蒸餾完畢應先取下接收瓶，然后關(guān)閉電源，以免酸液倒流。
2.1.11 在測定飼料試樣含量的同時，應用蔗糖做空白對照測定，以校正試劑不純所發(fā)生的誤差。
2.2 飼料中粗蛋白質(zhì)含量測定過程特殊樣品的處理及相關(guān)問題
2.2.1 對于液體或膏油狀試樣在取樣時應注意取樣的代表性，用干凈并可放入消化管中的小玻璃容器稱樣。
2.2.2 如果試樣中蛋白質(zhì)含量高，可適當減少稱樣量，同時考慮蒸餾完全的問題，可適當延長蒸餾時間。
2.2.3 對于發(fā)霉變質(zhì)的飼料，由于其硝酸鹽含量偏高，可直接引起測定值偏低。
2.2.4 各種飼料的粗蛋白質(zhì)中實際含氮量，差異很大，變異范圍在14.7%～19.5%，平均為16%。凡飼料的粗蛋白質(zhì)中氮含量尚未確定的，可用平均系數(shù)6.25乘以氮量換算成粗蛋白質(zhì)量。凡飼料的粗蛋白質(zhì)的含氮量已經(jīng)確定的，可用它們的實際系數(shù)來換算。例如蕎麥、玉米用系數(shù)6.00，大豆、蠶豆、燕麥、小麥、黑麥用系數(shù)5.70，牛奶用6.38。
2.2.5 為檢查蒸餾過程是否有蒸汽逸失，可用硫酸銨代替試樣測定氨含量，計算含氮量應為(21.29±0.2)%。
3 飼料中粗脂肪的測定
粗脂肪是飼料中可以溶于石油醚或乙醚的物質(zhì)總稱，除包括脂肪和類脂(磷脂、糖酯和固醇等)外，還包括可溶于石油醚的其他有機物質(zhì)，如游離脂肪酸、磷脂、脂溶性纖維素、色素、脂溶性維生素和臘質(zhì)等，故稱為粗脂肪。
采用GB/T 6433-2006《飼料中粗脂肪的測定》，適用于油籽和油籽殘渣以外的動物飼料。
3.1 粗脂肪測定實驗操作中需要注意的問題
3.1.1 樣品在105℃條件下烘干1h或用測定水分后的樣品進行測定，用儀器法的稱樣量為1g，完全手工法的稱樣量為5g。
3.1.2 稱取的樣品需要粉碎并全部通過40目篩，試樣粉末過粗，脂肪不易抽提干凈;樣品粉末過細，則有可能透過濾紙孔隙隨回流溶劑流失，影響測定結(jié)果。
3.1.3 將稱好的樣品轉(zhuǎn)移到定性濾紙上打包，并用脫脂棉線扎緊。打包時，要求包成窄的條塊狀，多余線頭不要太長，且應塞入夾縫中為好，以便于在放入索氏提取器時，易操作、節(jié)省浸提腔的空間。
3.1.4 將索氏提取器各部位充分洗滌并用蒸餾水清洗后烘干。脂肪燒瓶在103±2°C的烘箱內(nèi)干燥至恒重。所用抽提用有機溶劑都需要進行脫水處理，如含有水分則可能將樣品中的糖以及無機物抽出，造成誤差。
3.1.5 濾紙包放入提脂腔中時，不能超過虹吸管上端。石油醚在濾紙上揮發(fā)不留下油跡為浸提終點。
3.1.6 提取時溫度不能過高，一般使石油醚剛開始沸騰即可，控制回流速度每小時至少循環(huán)10次或每秒至少5滴(10mL/min)。
3.1.7 將提取瓶放在烘箱內(nèi)干燥時，瓶口向一側(cè)傾斜45℃放置，使揮發(fā)物石油醚易與空氣形成對流，這樣干燥迅速。
3.1.8 樣品及醚提出物在烘箱內(nèi)烘干時間不要過長，因為一些很不飽和的脂肪酸，容易在加熱過程中被氧化成不溶于石油醚的物質(zhì);中等不飽和脂肪酸，受熱容易被氧化而增加重量。
3.1.9 石油醚有兩種規(guī)格，應使用沸點40～60℃為好。
3.1.10 抽提室內(nèi)嚴禁有明火存在或用明火加熱，應用電熱套或水浴進行加熱。
3.2 粗脂肪測定中特殊樣品的處理及相關(guān)問題
3.2.1 脂肪含量高于20%的試樣，稱取5～20g試樣，與10g 無水硫酸鈉混合，石油醚提取，蒸餾除去溶劑，干燥后將殘渣粉碎成1mm大小的顆粒，再稱取進行脂肪的測定。
3.2.2 樣品含多量糖及糊精的，要先以冷水處理，等其干燥后聯(lián)同濾紙一起放入提取器內(nèi)。
3.2.3 如果是牛油粉那樣的包被性，可準確稱取2g試樣置于研缽中，加入10～15g無水硫酸鈉，認真研磨后全部移入濾紙，所用研缽、研磨棒均用被石油醚浸濕的脫脂棉認真擦拭，沖洗后連同脫脂棉一起放入筒形濾紙中。
4 飼料中粗纖維的測定
采用GB/T 6434-2006《飼料中粗纖維測定方法》，適用于粗纖維含量大于10g/kg的飼料;谷物和豆類植物。
4.1 飼料中粗纖維的測定實驗操作中需要注意的問題
4.1.1 樣品粉碎并能完全通過篩孔為1.0mm的篩。
4.1.2 在酸煮后和堿煮后沖洗至中性過程中，最好用熱蒸餾水，易于過濾。
4.1.3 灰化皿可用瓷坩堝代替。
4.1.4 定量濾紙與定性濾紙的主要差異在于粗灰分的含量不同，定量濾紙粗灰分含量在0.01%(每張灰分0.000 103g)，可忽略不計，而定性濾紙粗灰分含量為0.15%左右。
4.2 飼料中粗纖維的測定中特殊樣品的處理及相關(guān)問題
含脂肪小于1%的樣本可不脫脂;含脂肪1%～10%的樣本不是必須的， 但建議脫脂;含脂肪在10%以上的則必須脫脂， 或用測脂后的試樣殘渣進行粗纖維的測定。
5 飼料中粗灰分的測定
采用GB/T 6438-2007《飼料中粗灰分的測定》，適用于動物飼料中粗灰分的測定。
5.1 粗灰分測定實驗操作中需要注意的問題
5.1.1 用電爐碳化時應小心控制溫度，以防碳化過快，試樣飛濺。特別是含油或糖分高的飼料或液體飼料，可加一定量濾紙蓋住，防止泡沫溢出。
5.1.2 為了避免樣品氧化不足，不應把樣品壓得過緊，樣品應松松地放在坩堝上。
5.1.3 灼燒溫度不宜超過600°C，否則會引起磷、硫等鹽的揮發(fā)。
5.1.4 灼燒后殘渣顏色與試樣中各元素含量有關(guān)，含鐵高時為紅棕色，含錳高時為淡藍色，但當有明顯黑色碳粒時，為碳化不完全，應延長灼燒時間。
5.1.5 灼燒后的灰分應呈灰白色無碳粒，若4h以上還未灰化完全，可取出，冷卻后加幾滴硝酸或過氧化氫，在電爐上干燥后再灰化。
5.2 粗灰分測定過程中特殊樣品的處理及相關(guān)問題
5.2.1 如試樣中鹽類含量過高，應在碳化后用水溶解出鹽類，將不溶物集于定量濾紙中，連同濾紙放入坩堝加熱灰化。然后，將其與浸出鹽類的濾液合在一起，加熱蒸發(fā)，使之最后達到熾熱狀態(tài)。最后，靜止冷卻、稱重，這一重量減去坩堝空重即為粗灰分的量。
5.2.2 為避免坩堝蓋混淆，需在瓷坩堝上做標記，可用三氯化鐵溶液處理，方法為：取0.5%三氯化鐵溶液30mL，加數(shù)滴0.1mol/L硝酸銀溶液(或鋼筆水)，混勻，用細筆蘸取此溶液在瓷坩堝上做標記，然后將其置于(550±20)℃高溫電爐中灼燒后即可。
6 飼料中鈣含量的測定需要注意的問題
動物體內(nèi)礦物質(zhì)元素約占4%，而Ca、P、Mg占礦物質(zhì)元素的75%。可見，鈣對動物來說是一種必需的元素。一般飼料中鈣含量不超過1%，而魚粉、骨粉類飼料中鈣為5%～11%。
飼料中鈣的測定方法有高錳酸鉀間接測鈣法(仲裁法)和乙二胺四乙酸二鈉絡合滴定法。對于鈣含量低的樣品可采用原子吸收分光光度法，該方法雖未被列為飼料分析的國標方法，但在食品加工業(yè)、林業(yè)分析中已為國家標準采用。該方法特別適用于大批樣品的測定，準確度、精密度完全能滿足飼料分析需求。
6.1 按照GB/T 6436-2002《飼料中鈣的測定》仲裁法進行飼料中鈣含量的測定，適用于單一飼料和配合飼料，檢出限為150mg/kg。操作中應注意以下要點：
6.1.1 首先應根據(jù)試樣的性質(zhì)，采用合適的分解方法，有機物或干飼料采用干法，灰化要完全;而無機物或液體飼料應采用濕法，即：稱取試樣2～5g置于凱氏燒瓶中，準確至0.0002g，加入硝酸30mL，煮沸至NO2氣體逸盡，冷卻后加入70%～72%高氯酸10mL，小心煮沸至無色，不得蒸干(危險)，冷卻后加蒸餾水50mL，煮沸，驅(qū)逐NO2，冷卻后移入100mL容量瓶中定容。
6.1.2 加入草酸銨時一定要慢，且不斷攪拌，使形成的晶體較大，還要過夜使沉淀陳化。
6.1.3 洗滌草酸鈣沉淀時，必須沿濾紙邊緣向下洗，使沉淀集中于濾紙中心，以免損失。每次洗滌過濾時，都必須等上次洗滌液完全濾凈后再加，每次洗滌不得超過漏斗體積的2/3。
6.1.4 在用高錳酸鉀溶液滴定完成后，要進行空白滴定。
6.1.5 每種濾紙的空白值不同，消耗高錳酸鉀溶液體積也不同。因此至少每盒濾紙應做一次空白溶液測定，滴定空白溶液時應包括濾紙在內(nèi)。
6.1.6 高錳酸鉀溶液濃度不穩(wěn)定，最好在4℃冰箱內(nèi)保存并應至少每月標定一次。
6.2 按照GB/T 6436-2002 EDTA絡合滴定法進行飼料中鈣含量的測定，操作中應注意以下要點：
6.2.1 在煮沸時要注意溫度，避免液體濺出。
6.2.2 淀粉溶液要求現(xiàn)用現(xiàn)配。
6.2.3 由于三乙醇胺本身黏度較大，配成50%的溶液便于使用;乙二胺由于揮發(fā)性較強，也要配成50%的溶液使用。
6.2.4 必須用氫氧化鉀溶液，不得使用氫氧化鈉代替。
6.2.5 滴定過程中若溶液呈現(xiàn)紫紅色，需要靜置約半分鐘，若不變回綠色，才能判定為終點。
6.2.6 指示劑的量要適當，否則影響終點的觀察。
7 飼料中總磷含量的測定需要注意的問題
磷是動物所必需的礦物質(zhì)元素之一，骨骼中僅有4.5%的磷。飼料中磷一般為0.1%～1.0%，只有肉粉中磷可超過5%。
磷的測定方法多采用分光光度法，但是顯色方法不同，分為釩鉬黃比色法和磷鉬藍比色法等。本文采用GB/T 6437-2002《飼料中總磷的測定 分光光度法》中釩鉬黃比色法，該方法重現(xiàn)性好，適用于各種單一飼料和配合飼料中總磷的測定。在操作中要注意的事項包括以下幾點。
7.1 試樣分解(同6.1.1所述)。
7.2 釩鉬酸銨顯色試劑應避光保存，如生成沉淀則不能使用。
7.3 配制釩鉬酸銨顯色劑時，偏釩酸銨和鉬酸銨皆不易溶。
7.4 釩鉬酸銨顯色劑用完需再配制時，標準曲線應重新繪制。
7.5 標準曲線通常選擇5個濃度較合適，標準曲線的R2應大于0.999。
7.6 試樣的吸光度值不得超出標準曲線的范圍，待測溶液中磷含量最好控制在每毫升含磷0.5mg 以下。
7.7 待測溶液在加入顯色劑后需要靜置10min，再進行比色，但也不能靜置過久。
8 飼料中水溶性氯化物的測定需要注意的問題
8.1 在標定硝酸銀或滴定試樣溶液時，速度應快，而且不能過分劇烈搖動，以防發(fā)生下列反應：
AgCl + SCN- = AgSCN + Cl-
這樣會因氯化銀沉淀轉(zhuǎn)化成硫氰酸銀沉淀，使消耗的硫氰酸銨溶液體積增加，而使結(jié)果偏低。
8.2 本法測定中是根據(jù)氯離子來計算氯化鈉含量的，但由于添加到飼料中的氨基酸、維生素和抗生素等添加劑都可能帶入氯離子，所以通過此法測定的氯化鈉含量往往比實際添加的氯化鈉的量高。
綜上所述，影響分析結(jié)果的因素是非常多的，在實驗過程中必須細心觀察，認真操作，注意每一個細微的環(huán)節(jié)，才能獲得符合要求的檢測結(jié)果，才能真正對產(chǎn)品進行合理的評定。
此外，若要從大批原料或飼料中抽取部分樣品來進行分析得出正確結(jié)果，完全如實地反映原物的組成成分，樣品的正確采集和制備仍是重要步驟。正確采集并送至實驗室中的平均樣品較粗、不均勻，因此在分析前都需要進行粉碎、混勻、縮分、裝瓶、貼標簽等，這一系列操作過程稱樣品制備。本文在樣品采集和實驗室制備上并未深入探討。希望讀者能夠在這些方面參考其他資料，做到正確采集和制樣。
